本标准规定了饲料中β -胡萝卜素的高效液相色谱测定方法。
本标准引用的文件有：GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法；GB/T 20195 动物饲料 试样的制备。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
本标准中的测定原理为：试样中β -胡萝卜素经碱溶液超声皂化，生成全反式β -胡萝卜素，经石油醚萃取，减压浓缩后，用高效液相色谱法测定，外标法定量。
本标准测定用到的试剂或材料以及仪器设备包括：除非另有规定，仅使用分析纯试剂；水；甲醇；异丙醇；二氯甲烷；石油醚(沸程30℃～60℃)；正己烷；无水硫酸钠；乙二胺四乙酸二钠(EDTA)；2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)；L-抗坏血酸乙醇溶液；50%氢氧化钾溶液；饱和氯化钠溶液；标准储备溶液(500 µg/mL)；标准中间溶液(100 µg/mL)；标准系列溶液；微孔滤膜；高效液相色谱仪；分析天平；超声波清洗器；旋转蒸发仪；旋涡仪；分光光度计等。
试验步骤包括：皂化。平行做两份试验。称取试样配合饲料、精料补充料、浓缩饲料2 g～5 g或添加剂预混合饲料0.2 g～1 g，精确至0.001 g，置于250 mL具塞棕色三角瓶，加入 EDTA (5.8)1 g，边摇边加入L-抗坏血酸乙醇溶液(5.10)50 mL使试样完全分散、浸湿，加入10 mL 50%氢氧化钾溶液(5.11)，混匀，50℃水浴加热超声皂化20 min，不时振荡防止试样粘附在瓶底和瓶壁上，皂化结束后取出迅速冷却至室温。
提取。将皂化液转移至盛有 80 mL 石油醚(5.5)的 500 mL 分液漏斗中，用 30 mL～50 mL 水分 2 次～3次冲洗棕色三角瓶并入分液漏斗，旋紧瓶塞，轻轻振荡，放气，静置分层。转移水相至另一分液漏斗中，加入 60 mL 石油醚(5.5)重复提取两次，弃去水相，合并三次石油醚相。用 100 mL 饱和氯化钠溶液(5.12)洗涤石油醚提取液一次，轻轻旋摇防止乳化，弃去水相；再用水洗涤石油醚提取液至中性。石油醚提取液过无水硫酸钠(5.7)过滤脱水，转移至放有几粒 BHT(5.9)的 250 mL 棕色容量瓶中，用石油醚(5.5)定容，摇匀。
浓缩。从石油醚提取液(8.2)中(V)分取一定体积(V1)于旋转蒸发器烧瓶中，置于 40℃±2℃减压浓缩至近干，残渣用流动相 5.00mL(V2)复溶解，使每毫升含β -胡萝卜素 10 µg 以下，旋涡混匀，用 0.45 µm 滤膜(5.16)过滤备用。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料中β -胡萝卜素的测定。
本标准配合饲料、浓缩饲料、精料补充料的定量限为 1 mg/kg，添加剂预混合饲料定量限为 2 mg/kg。
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